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传染病样本高速分离可降低假阳性

分享: 发布日期:2016-02-22  来源:原创  作者:admin  浏览次数:66
导读

实验结果表明:低速离心和高速离心复检,HBsAg 的复检阳性率分别是 58.62% 和 27.59%,HIVAg/Ab 的复检阳性率分别是 34.78% 和 8.70%。这说明在 HBsAg 定量检测和 HIV-Ag/Ab 检测中初检低值阳性样本存在很多假阳性,也说明复检时采用高速离心分离样本后复检是很有必要的...

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传染病的血清学检测通常是指针对乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋体四种感染性病原体的血清标志物检测,包括 HBsAg、HIV-Ab、抗 HCV、TP-Ab。目前已属于临床实验室的常规检测项目。
化学发光免疫分析技术是一种将化学发光和免疫反应相结合而建立起来的一种可检测微量抗原或抗体的新型标记免疫分析技术,具有高灵敏度、高特异度、重复性好、检测时间短、可自动化检测等优点。尤为适合于传染病四项的快速检测,检测效果优于酶联免疫吸附法。基于化学发光免疫分析技术的自动化免疫分析仪也已经广泛应用于国内各大中型临床实验室。
我们实验室也采用某知名品牌的仪器检测传染病四项,但是很快发现了一个问题。
问题的发现起源于科主任带领大家的一次关于传染病四项检测的确证方法的讨论学习。讨论中列举了一些乙肝病毒表面抗原(HBsAg)定量检测结果 0.05-0.10 mIU/L 的样本,提出这些样本应该进行 HBsAg 确证检测,否则考虑到灰区范围,将难以认定这些样本是 HBsAg 真阳性(HBsAg ≥ 0.05 mIU/L 判定为阳性)还是假阳性。
随之而来的问题就是抛开确证检测,这些低值阳性结果是否因别的因素造成。
首先想到的是样本。
关于检测样本,众所周知血清或血浆是临床实验室最常用的标本类型。血清或血浆的分离通常采用 3000-5000RPM 低速离心,且能够满足临床实验室大多数项目的检测需求,通常也用于化学发光免疫分析技术检测传染病四项。会不会因为样本分离不充分?
众所周知,相对离心力 10000RCF(相当于高速离心 12000RPM)以上的离心才能最大限度避免纤维蛋白、血细胞及其碎片、血液中可能存在的其他粒子对抗原、抗体检测的影响。查阅试剂说明书,虽然在样本分离部分没有明确提出是否需要采用高速离心分离样本,但是在注意事项中指出为了保证两次检测结果之间的重复性最好使用高速离心(相对离心力大于 10000RCF)分离样本。文献显示以往研究者对影响因素也多有讨论,但未就离心速度做出明确描述答案不明确。
问题需要面对,初检低值阳性样本的出现不仅给患者带来心理负担,也延长了检测时间、增加了检测费用。答案并不明确,那么我们去寻找答案。
于是在主任的指导下,收集了部分初检低值阳性样本。所有样本的血清或血浆分别经低速离心(3500RPM)和高速离心(12000RPM)后进行双管复检,以双管检测阳性或单管检测阳性判定为复检阳性,以双管检测阴性判定为复检阴性。结果怎么样?
结果让我们自己也很吃惊。低速离心和高速离心复检,HBsAg 的复检阳性率分别是 58.62% 和 27.59%,HIVAg/Ab 的复检阳性率分别是 34.78% 和 8.70%。这说明在 HBsAg 定量检测和 HIV-Ag/Ab 检测中初检低值阳性样本存在很多假阳性,也说明复检时采用高速离心分离样本后复检是很有必要的。
吃惊的还有。我们发现提高离心速度对抗 HCV 和 TP-Ab 的影响明显较小。低速离心和高速离心后二者也能够发现个别假阳性和假阴性样本,但是总体上复检阳性率没有发生显著性变化。
我们终于给自己提供了一份相对完整的答案,就是在使用化学发光技术检测传染病四项时,应该明确:
(1)传染病四项检测过程中,复检很重要;(2)对于高灵敏度、高特异度的化学发光法,初检低值阳性样本经常规使用的低速离心分离样本后复检,存在假阳性和假阴性结果;(3)主要是假阳性结果;(4)初检阳性样本应使用高速离心分离样本。
一次讨论引出一项研究却产生了很大的效果,不仅加强了我们关于化学发光法和传染病四项的了解,也同时优化了操作方案,更重要的是降低了复检阳性率,降低了患者的成本,降低了实验室的成本。
 
 


 
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